تشخیص سریع عامل بیماری لوک اروپایی (ملیسوکوکوس پلوتونیوس) در کلنی های زنبور عسل با روش PCR

نوع مقاله : علمی- ترویجی

چکیده

مقدمه : بیماری لوک اروپایی، بیماری نوزادان زنبور عسل می باشد. این بیماری از جمله بیماریهای خطرناک برای کلنی های زنبور عسل محسوب می شود و در اثر باکتری گرم مثبت  ملیسوکوکوس پلوتونیوس ایجاد می گردد. این بیماری به صورت گسترده ای در جهان پراکنده است و در برخی از نواحی مشکلات فزآینده ای را ایجاد می نماید. پیشرفت های اخیر در تکنولوژی مولکولار، تشخیص هویت باکتری را بسیار سهل و آسان نموده است و تکنولوژی تشخیص اسیدهای نوکلئیک بسرعت جایگزین روش سنتی میکروبیولوژی شده است. هدف این مطالعه راه اندازی روش PCR برای تشخیص سریع و مطمئن این بیماری در ایران بوده است. از سوی دیگر دخالت عوامل ثانویه باکتریایی موجب شدت و تنوع در بروز علائم بالینی بیماری شده و تشخیص آزمایشگاهی را در مواردی با مشکل مواجه می سازد. بیماری لوک اروپایی در فهرست بیماریهای خطرناک برای بهداشت دامها قرار دارد و در بسیاری از مناطق بیماری بومی بوده و اپیدمی های فصلی ایجاد می کند.
روش کار: با استفاده از سویه باکتری استاندارد و با استفاده از پرایمرهای اختصاصی،PCR راه اندازی گردید. محصول PCR روی ژل آگارز 1 درصد الکتروفورز شد.همچنین با مراجعه به زنبورداریهای مشکوک به این بیماری از 12 زنبورستان لاروهای زنبور عسل جمع آوری گردیدند. نمونه ها همزمان با روش کشت باکتریایی و روش PCR مورد آزمایش قرار گرفتند.
نتایج: از 12 نمونه اخذ شده اززنبورستان های مشکوک، 8  نمونه در PCR مثبت و 2 نمونه در کشت مثبت شد.

کلیدواژه‌ها


ALIPPI AM., (1991). A comparison of laboratory techniques for the detection of significant bacteria of the honey bee, Apis mellifera, in Argentina, J. Apic. Res. 30: 75–80.
 
ARAI R., TOMINAGA. K., WU M., OKURA M., ITO K., OKAMURA N., ONISHI H., OSAKI M., SUGIMURA Y., YOSHIYAMA M., TAKAMATSU D., (2012). Diversity of Melissococcus plutonius from honey bee larvae in Japan and experimental reproduction of European foulbrood with cultured atypical isolates. PLOS ONE 7(3): e33708.
 
BAILEY L., FERNANDO E.F.W., and STANLEY B.H. (1973). Streptococcusfaecalis, Bacillus alvei, and sacbrood virus in European foulbrood of the honey bee. J. Invertebrate Pathol. 22: 450-453
.
BAILEY L., (1957). The isolation and cultural characteristics of Streptococcus pluton and further observations on "Bacterium eurydice". Journal of General Microbiology 17(2): 39-48.
 
CHARRIÈRE J-D., KILCHENMANN V., ROETSCHI A., (2011). Virulence of different Melissococcus plutonius strains on larvae tested by an in vitro larval test; In Proceedings of the 42nd International Apicultural Congress, Buenos Aires 2011: p 158.
 
DAHLE B., SØRUM H., WEIDEMANN J.E., (2011). European foulbrood in Norway: How to deal with a major outbreak after 30 years absence. In Proceedings of the COLOSS Workshop: The future of brood disease research – guidelines, methods and development, Copenhagen, Denmark, 10-12 April, 2011, p 8.
 
FORSGREN E., (2010). European foulbrood in honey bees. Journal of Invertebrate Pathology 103(Suppl. 1): S5-S9.
 
GRANGIER V., (2011). Early detection of European foulbrood using real-time PCR. PhD thesis, Vetsuisse faculty, University of Bern, Switzerland.
 
HORNITZKY M.A.Z., SMITH L., (1999). The sensitivity of Australian Melissococcus pluton isolates to oxytetracycline hydrochloride. Australian Journal of Experimental Agriculture 39(7): 881-883.
 
 
HORNITZKY, M A Z; WILSON; S (1989).A system for the diagnosis of the major bacterial brood diseases. Journal of Apicultural Research, 28: 191-195.
 
McKEE B.A., DJORDJEVIC S.P., GOODMAN R.D., HORNITZKY M.A., (2003). The detection of Melissococcus pluton in honey bee (Apis Mellifera) and their product using a hemi-nested PCR. Apidology , 34: 19-27.
 
MUNDT J.O., (1976). Streptococci in dried and frozen foods. Journal of Milk and Food Technology 39: 413–416.
 
OIE TERRESTRIAL MANUAL (2010). Chapter 2.2.3.
 
PINNOCK D.E., FEATHERSTONE N.E., (1984). Detection and quantification of Melissococcus pluton infection in honey bee colonies by means of enzyme-linked immunosorbent assay. Journal of Apicultural Research 23: 168-170.
 
RITTER W., (1996). Diagnostik und Bekaempfung der Bienenkrankheitem. P 93-95.
 
SAMBROOK J., FRITSCH  E.F., MANIATIS T., (2001). Molecular cloning: a laboratory manual, 2nd edn. Cold Spring Harbor Laboratory  Press, Cold Spring Harbor, NY. p 5.4-5.13
 
The COLOSS bee book:(2013). Chapter EFU. P 1-14.
 
WILKINS S., BROWN M.A., CUTHBERTSON A.G.S., (2007). The incidence of honey bee pests and diseases in England and Wales. Pest Management Science 63: 1062-1068.